Assessing Mitochondrial Health in Oncology / Valutare la salute mitocondriale in oncologia

Assessing Mitochondrial Health in Oncology. The process of the ENEA patent RM2012A000637 is very useful in this application./ Valutare la salute mitocondriale in oncologia. Il procedimento del brevetto ENEA RM2012A000637 è molto utile in questa applicazione.

Segnalato dal Dott. Giuseppe Cotellessa / Reported by Dr. Giuseppe Cotellessa

HeLa cells are labeled using the Incucyte® MMP Orange Reagent in order to quantify the mitochondrial membrane potential (fluorescence intensity increases in hyperpolarized state and decreases as the membrane depolarizes). / Le cellule HeLa vengono etichettate utilizzando il reagente arancione Incucyte® MMP nell'ordine quantificare il potenziale di membrana mitocondriale (intensità di fluorescenza aumenta in stato di iperpolarizzazione e diminuisce quando la membrana si depolarizza).

Mitochondria are maternally inherited, cytoplasmic

 organelles, that are critical for normal cell function

 and health.

 They also play a pivotal role in cancer cells, and

 are important for tumor initiation, maintenance and

 growth. Mitochondrial ATP production provides a

 more efficient energy source over glycolysis

, allowing tumor cells to survive tough nutrient

 environments.

 Therefore, it is important to understand the

 complex relationship between cancer cells and

 mitochondria, especially when evaluating how

 metabolic symbiosis promotes drug resistance. In

 this infographic, we explore the solutions used to

 evaluate changes in mitochondrial membrane

 potential and cytostolic adenosine triphosphate

Mitochondrial Membrane Potentia

l An important factor in mitochondrial health is the

 maintenance of the electrochemical potential of

 hydrogen ions needed for the synthesis of ATP. 

The mitochondrial membrane potential (MMP or

 ΔΨm) is an essential component of this process

, and long-term disruptions can greatly impact cell

 health and viability. 

Monitoring MMP provides a sensitive and early

 indication of mitochondrial integrity and is crucial

 in identifying mitochondrial dysfunction related to

 pathological diseases.

1. Evaluate mitochondrial stress A simple mix-and-

read protocol allows kinetic measurements of

 mitochondrial stress. 

2.Measure MMP changes in live cells MMP

 measurements within a cell culture incubator are

 generated automatically, quantitatively and

 reproducibly.

 3.Monitor morphological changes and

 multiplexing Combine MMP reagent with cell

 health reagents to evaluate morphological and

 metabolic (e.g. apoptosis or cytotoxicity) changes

 over time.

Cytosolic ATP Assays

The Incuycte® ATP assay is used to evaluate the

 effect of a glutaminase inhibitor (CB-839) on

 cytosolic ATP levels in triple-negative breast

 cancer (HCC38) cells co-cultured with fibroblasts

 (CCD14086SK) as a model of stromal-tumor cell

 nutrient exchange. / Il test Incuycte® ATP viene

 utilizzato per valutare l'effetto di un inibitore della

 glutaminasi (CB-839) sui livelli citosolici di ATP

 in cellule di carcinoma mammario triplo negativo

 (HCC38) in co-coltura con fibroblasti

 (CCD14086SK) come modello di cellula tumorale

 stromale scambio di nutrienti.

The metabolic rewiring of cancer cells is one

 hallmark of cancer which increases the rate of

 proliferation and survival in the tumor

 microenvironment. Evaluating metabolic changes

 in complex cancer cell models as they proliferate

 and interact with their environment is, therefore

, very important to understanding cancer itself and

 helping to develop effective therapeutics.

1. Monitor cytosolic ATP in live cells The

 Incucyte® CytoATP Lentivirus Reagent Kit

 facilitates direct measurements of cytosolic ATP

 without perturbing live cells. 

2.Identify specific ATP changes in different cell

-types Cell-type specific effects can be identified in

 advanced cell models by capturing and

 analysing dynamic cytosolic changes in ATP. 

3.Conduct kinetic ATP studies Greater biological

 insights can be achieved by generating real-time

 ATP measurements — no concatenated endpoints

 necessary. 

4.Analyze changes in cell morphology HD phase

 images can help inspect changes

 in cell morphology at every time point. 

 Kinetic Live-Cell Image Acquisition and Analysis

 with Incucyte®

The Incucyte® Live-Cell Analysis System is a

 flexible assay platform that sits inside a standard

 tissue-culture incubator. 

This system continuously acquires and analyzes

 HD phase and fluorescent images of living cells

 cultured in microplates, dishes, or flasks. 

Using the Incucyte® Cell-By-Cell Analysis

 Software Module, researchers can conduct label

-free cell counts on adherent and non-adherent cells

 and classify cells based on their shape, size or

 fluorescence intensity. 

This can be used to quantify dynamic changes in

 subpopulations within a mixed culture.

ITALIANO

I mitocondri sono organelli citoplasmatici ereditati

 dalla madre, fondamentali per la normale funzione

 e salute delle cellule.

 Svolgono anche un ruolo fondamentale nelle

 cellule tumorali e sono importanti per l'inizio, il

 mantenimento e la crescita del tumore. La

 produzione mitocondriale di ATP fornisce una

 fonte di energia più efficiente rispetto alla glicolisi,

consentendo alle cellule tumorali di sopravvivere

 in ambienti ricchi di nutrienti.

 Pertanto, è importante comprendere la complessa

 relazione tra cellule tumorali e mitocondri,

soprattutto quando si valuta come la simbiosi

 metabolica promuova la resistenza ai farmaci. In

 questa infografica, esploriamo le soluzioni

 utilizzate per valutare i cambiamenti nel potenziale

 della membrana mitocondriale e nell'adenosina

 trifosfato citostolico (ATP).

Potenzialità della membrana mitocondriale

l Un fattore importante per la salute mitocondriale è

 il mantenimento del potenziale elettrochimico

 degli ioni idrogeno necessari per la sintesi

 dell'ATP.

Il potenziale di membrana mitocondriale (MMP o

 ΔΨm) è una componente essenziale di questo

 processo e le interruzioni a lungo termine possono

 avere un grande impatto sulla salute e sulla vitalità

 delle cellule.

Il monitoraggio dell'MMP fornisce un'indicazione

 sensibile e precoce dell'integrità mitocondriale ed è

 fondamentale per identificare la disfunzione

 mitocondriale correlata a malattie patologiche.

1. Valutare lo stress mitocondriale Un semplice

 protocollo mix-and-read consente misurazioni

 cinetiche dello stress mitocondriale.

2. Misurare i cambiamenti dell'MMP nelle cellule

 vive Le misurazioni dell'MMP all'interno di un

 incubatore di coltura cellulare sono generate

 automaticamente, quantitativamente e

 riproducibilmente.

 3. Monitorare i cambiamenti morfologici ed il

 multiplexing Combinare il reagente MMP con i

 reagenti per la salute delle cellule per valutare i

 cambiamenti morfologici e metabolici (ad es.

 apoptosi o citotossicità) nel tempo.

Saggi di ATP citosolico

Il ricablaggio metabolico delle cellule tumorali è un

 segno distintivo del cancro che aumenta il tasso di

 proliferazione e sopravvivenza nel microambiente

 tumorale. Valutare i cambiamenti metabolici in

 modelli complessi di cellule tumorali mentre

 proliferano e interagiscono con il loro ambiente è

, quindi, molto importante per comprendere il

 cancro stesso e aiutare a sviluppare terapie efficaci.

1. Monitorare l'ATP citosolico nelle cellule vive Il

 kit di reagenti per lentivirus Incucyte® CytoATP

 facilita le misurazioni dirette dell'ATP citosolico

 senza perturbare le cellule vive.

2.Identificare cambiamenti specifici dell'ATP in

 diversi tipi cellulari. Gli effetti specifici del tipo

 cellulare possono essere identificati in modelli

 cellulari avanzati catturando e analizzando i

 cambiamenti citosolici dinamici nell'ATP.

3. Condurre studi cinetici sull'ATP

 E' possibile ottenere maggiori informazioni

 biologiche generando misurazioni dell'ATP in

 tempo reale, senza bisogno di endpoint

 concatenati.

4. Analizzare i cambiamenti nella morfologia

 cellulare. Le immagini della fase HD possono

 aiutare a ispezionare i cambiamenti nella

 morfologia cellulare in ogni momento.

 Acquisizione e analisi di immagini cinetiche di

 cellule vive con Incucyte®

Il sistema di analisi Incucyte® Live-Cell è una

 piattaforma di analisi flessibile che si trova

 all'interno di un incubatore di coltura tissutale

 standard.

Questo sistema acquisisce e analizza continuamente

 la fase HD e le immagini fluorescenti di cellule

 viventi coltivate in micropiastre, piatti o fiasche.

Utilizzando il modulo software di analisi cellula-

per-cellula Incucyte®, i ricercatori possono

 eseguire conteggi cellulari senza etichetta su

 cellule aderenti e non aderenti e classificare le

 cellule in base alla loro forma, dimensione o

 intensità di fluorescenza.

Questo può essere usato per quantificare i

 cambiamenti dinamici nelle sottopopolazioni

 all'interno di una cultura mista.

Da:

https://f.hubspotusercontent40.net/hubfs/547446/Technology%20Networks/TN%20Email%20Campaigns%20and%20App%20Alerts/Landing%20Page%20Promotions/TN_Sartorius%20Mitochondrial%20Health%20Oncology_Infographic_final.pdf?__hstc=8807082.44b0f6eac84be5818378483b36bfad3b.1601170002551.1634169054723.1634434801296.193&__hssc=8807082.1.1634434801296&__hsfp=674959255&hsCtaTracking=ac93f623-9cf2-465f-ae30-0b3a6bb1b609%7C1ea2cd08-a6cf-4af0-ac67-4b8013c8ae7b