Peptide Quantification in Plasma Using the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS Coupled with the Agilent 1290 Infinity II LC System / Quantificazione dei peptidi nel plasma utilizzando il sistema LC/MS Agilent 6495 a triplo quadrupolo accoppiato al sistema LC Agilent 1290 Infinity II

Peptide Quantification in Plasma Using the Agilent 6495 Triple Quadrupole LC/MS Coupled with the Agilent 1290 Infinity II LC System / Quantificazione dei peptidi nel plasma utilizzando il sistema LC/MS Agilent 6495 a triplo quadrupolo accoppiato al sistema LC Agilent 1290 Infinity II

Segnalato dal Dott. Giuseppe Cotellessa / Reported by Dr. Giuseppe Cotellessa

Figure 1. Quantitative performance of the SIS peptide AFLLTPR from apolipoprotein M in plasma. Standard curve of SIS peptide AFLLTPR for the range from 5 amol/µL to 100 fmol/µL in 1 µg/µL plasma digest with inset showing detail for the range of the curve from 5 to 50 amol/µL. (B) extracted ion chromatograms for peptide AFLLTPR showing the LLOQ. / Prestazioni quantitative del peptide SIS AFLLTPR dall'apolipoproteina M nel plasma. Curva standard del peptide SIS AFLLTPR per l'intervallo da 5 amol/μL a 100 fmol/μL in 1 μg/μL di digerito plasma con inserto che mostra i dettagli per l'intervallo della curva da 5 a 50 amol/μL. (B) cromatogrammi ionici estratti per il peptide AFLLTPR che mostrano il LLOQ.

Abstract

This application note showcases the quantitative sensitivity, precision, and accuracy of multiple reaction monitoring (MRM)-based LC/MS analysis of peptides derived from protein biomarkers in human plasma using the Agilent 1290 Infinity II LC system coupled to the Agilent 6495 triple quadrupole LC/MS with Jet Stream ionization source. Results demonstrated outstanding performance of peptide quantification in human plasma using this standard flow‑based LC/TQ system. 

Experimental 

– LC: Agilent 1290 Infinity II LC system – MS: Agilent 6495C triple quadrupole LC/MS system with Jet Stream source – Column: Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2.1 × 150 mm, 1.8 µm (part number 959759-902) – Sample prep: Human plasma was digested with trypsin, then spiked with stable-isotope standard (SIS) peptide mixture at nine different concentrations. – Software: Agilent MassHunter workstation Quantitative Analysis (v10.1)

 Results and discussion 

The 1290 Infinity II LC system gives excellent chromatography. Distribution of peptide retention time versus its corresponding RSD shows the RSD ranges from 0.01 to 0.42%, with a median RSD of 0.13%. To assess the quantitative sensitivity, precision, and accuracy for peptide quant, human plasma digests were spiked with SIS peptide mixture at nine different concentrations, then used to produce standard curves for 99 SIS peptides. Figure 1 shows the excellent quantitative performance of one of the SIS peptides – AFLLTPR from apolipoprotein M in plasma.

Conclusion 

This application note describes the overall analytical sensitivity of the 6495 triple quadrupole LC/MS for peptide quantification in human plasma. Using a commercially available biomarker assessment kit from a third-party vendor, the outstanding performance of the 6495 LC/TQ coupled with the 1290 Infinity II LC system and Jet Stream ionization source was demonstrated.

ITALIANO

Riassunto

Questa nota applicativa mostra la sensibilità quantitativa, la precisione e l'accuratezza dell'analisi LC/MS basata sul monitoraggio delle reazioni multiple (MRM) di peptidi derivati ​​da biomarcatori proteici nel plasma umano utilizzando il sistema LC Agilent 1290 Infinity II accoppiato al sistema LC Agilent 6495 a triplo quadrupolo /MS con sorgente di ionizzazione Jet Stream. I risultati hanno dimostrato prestazioni eccezionali di quantificazione dei peptidi nel plasma umano utilizzando questo sistema LC/TQ standard basato sul flusso.

Sperimentale

– LC: sistema LC Agilent 1290 Infinity II – MS: sistema LC/MS Agilent 6495C triplo quadrupolo con sorgente Jet Stream – Colonna: Agilent ZORBAX RRHD Eclipse Plus C18, 2,1 × 150 mm, 1,8 µm (codice articolo 959759-902) – Campione preparazione: il plasma umano è stato digerito con tripsina, quindi addizionato con una miscela peptidica standard di isotopi stabili (SIS) a nove diverse concentrazioni. – Software: analisi quantitativa della workstation Agilent MassHunter (v10.1)

 Risultati e discussione

Il sistema LC 1290 Infinity II offre un'eccellente cromatografia. La distribuzione del tempo di ritenzione del peptide rispetto al corrispondente RSD mostra che l'RSD varia dallo 0,01 allo 0,42%, con un RSD mediano dello 0,13%. Per valutare la sensibilità quantitativa, la precisione e l'accuratezza per il peptide quant, i digeriti di plasma umano sono stati addizionati con una miscela di peptidi SIS a nove diverse concentrazioni, quindi utilizzati per produrre curve standard per 99 peptidi SIS. La Figura 1 mostra l'eccellente prestazione quantitativa di uno dei peptidi SIS - AFLLTPR dall'apolipoproteina M nel plasma.

Conclusione

Questa nota applicativa descrive la sensibilità analitica complessiva del sistema LC/MS a triplo quadrupolo 6495 per la quantificazione dei peptidi nel plasma umano. Utilizzando un kit di valutazione di biomarcatori disponibile in commercio di un fornitore di terze parti, sono state dimostrate le eccezionali prestazioni del 6495 LC/TQ accoppiato al sistema 1290 Infinity II LC e alla sorgente di ionizzazione Jet Stream.

Da:

https://f.hubspotusercontent40.net/hubfs/547446/Technology%20Networks/Landing%20Pages/Agilent/2022/January%202022/application-LC-TQ-clinical-research-compendium-5994-2972EN-agilent.pdf?__hstc=8807082.074aceb79027e793890018c0152531d2.1643566337753.1652624739070.1653510235318.43&__hssc=8807082.1.1653510235318&__hsfp=4230998910&hsCtaTracking=67ad9c3e-d5b1-4803-9336-66b40dd5d1b8%7Cbd0c5b41-19aa-46e8-b540-a5494f683d6a