Analysis on FC-Gamma Receptor Interactions in Octet® Platforms / Analisi sulle interazioni del recettore FC-Gamma nelle piattaforme Octet®
Analysis on FC-Gamma Receptor Interactions in Octet® Platforms / Analisi sulle interazioni del recettore FC-Gamma nelle piattaforme Octet®
Segnalato dal Dott. Giuseppe Cotellessa / Reported by Dr. Giuseppe Cotellessa
Figure: Workflow of a FcRn-hIgG kinetic assay using anti-human FAB2G Biosensors. (A) hIgG is immobilized and FcγRIIIa is introduced as the
analyte. Other commonly used biosensor chemistries are Ni-NTA and Streptavidin. (B) Kinetic analysis using a 1:1 interaction model to determine
kinetics and affinity. (C) Steady state analysis using data represented in (B). Steady state (end-point) analysis can also be useful especially in
low affinity interactions or for systems that produces very fast on-rates. / Flusso di lavoro di un test cinetico FcRn-hIgG utilizzando biosensori FAB2G anti-umani. (A) hIgG viene immobilizzato e FcγRIIIa viene introdotto come analita. Altre sostanze chimiche biosensoriali comunemente utilizzate sono Ni-NTA e Streptavidina. (B) Analisi cinetica utilizzando un modello di interazione 1:1 per determinare la cinetica e l'affinità. (C) Analisi dello stato stazionario utilizzando i dati rappresentati in (B). Anche l'analisi allo stato stazionario (end-point) può essere utile soprattutto nelle interazioni a bassa affinità o per i sistemi che producono velocità di attivazione molto veloci.
Fc gamma receptors (FcγRs) are membrane glycoproteins
found on certain types of cell surfaces that contribute to
immune system functions. With high binding specificities to
Fc regions of immunoglobin G (IgGs), Fc-receptors bind to
IgGs displayed on pathogenic cells to trigger antibody
mediated cell-dependent cytotoxicity (ADCC) or phagocytosis. Fc-receptor interactions bind IgGs with a broad range
of affinities based on the type of receptor involved. FcγRI
(CD64) affinities to IgGs are characterized at 0.1 nM–10 nM,
while FcγRII (CD32) and FcγRIII (CD16) interactions are
measured at 0.1–10 µM affinities. In addition, binding
properties can be affected by genetic polymorphisms of
the receptors as well as glycosylation patterns in the Fc
region on the antibody.
Octet® BLI platforms are utilized for characterizing
Fc-gamma receptors due to their:
- Ability to rapidly measure binding interactions across a
wide range of affinities (1 mM–10 pM).
- Detect variabilities in affinities due to variations such as
glycosylation patterns.
- Availability of a wide range of biosensor chemistries for
ligand immobilization.
- High-throughput, and lower consumable costs.
An example workflow for performing an FcRn-hIgG kinetic
assay is shown in Figure.
ITALIANO
I recettori Fc gamma (FcγR) sono glicoproteine di membrana presenti su alcuni tipi di superfici cellulari che contribuiscono alle funzioni del sistema immunitario. Con elevate specificità di legame alle regioni Fc dell'immunoglobina G (IgG), i recettori Fc si legano alle IgG visualizzate sulle cellule patogene per innescare la citotossicità cellula-dipendente mediata da anticorpi (ADCC) o la fagocitosi. Le interazioni del recettore Fc legano le IgG con un'ampia gamma di affinità in base al tipo di recettore coinvolto. Le affinità FcγRI (CD64) con le IgG sono caratterizzate a 0,1 nM–10 nM, mentre le interazioni FcγRII (CD32) e FcγRIII (CD16) sono misurate a 0,1–10 µM di affinità. Inoltre, le proprietà di legame possono essere influenzate dai polimorfismi genetici dei recettori e dai modelli di glicosilazione nella regione Fc dell'anticorpo. Le piattaforme Octet® BLI sono utilizzate per caratterizzare i recettori Fc-gamma grazie alla loro:
- Capacità di misurare rapidamente le interazioni di legame attraverso un'ampia gamma di affinità (1 mM–10 pM).
- Rileva le variabilità nelle affinità dovute a variazioni come i modelli di glicosilazione.
- Disponibilità di un'ampia gamma di biosensori chimici per l'immobilizzazione di ligandi.
- Elevata produttività e minori costi dei materiali di consumo.
Nella figura è mostrato un flusso di lavoro di esempio per l'esecuzione di un test cinetico FcRn-hIgG.
Da:
https://offers.the-scientist.com/hubfs/TS_PPL_Sartorius_QC%20Octet_white%20paper/Octet-Label-Free-Detection-eBook-4007-en-L-Sartorius%20(1).pdf
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