Epitope Binning or Cross-Competition Assays on Octet® BLI Systems / Epitope Binning o saggi di competizione incrociata sui sistemi Octet® BLI

Epitope Binning or Cross-Competition Assays on Octet® BLI Systems / Epitope Binning o saggi di competizione incrociata sui sistemi Octet® BLI

Segnalato dal Dott. Giuseppe Cotellessa / Reported by Dr. Giuseppe Cotellessa

Figure: Octet® epitope binning assay formats: (A) In-tandem assay. Antigen is immobilized onto the biosensor followed by binding with saturating conditions on mAb1 and competing with mAb2. (B) Classical sandwich format. mAb1 is immobilized onto the biosensor followed by antigen capture by mAb1. mAb2 is then used to test for antigen binding. (C) Premix assay. One mAb is immobilized on the biosensor and bound with pre-bound antigen-mAb1 complex. Premix assay format is typically used to clarify ambiguous results obtained from other binning formats. /  Formati del test di binning dell'epitopo Octet®: (A) Test in tandem. L'antigene viene immobilizzato sul biosensore seguito dal legame con condizioni di saturazione su mAb1 e competendo con mAb2. (B) Formato sandwich classico. mAb1 viene immobilizzato sul biosensore seguito dalla cattura dell'antigene da parte di mAb1. mAb2 viene quindi utilizzato per testare il legame dell'antigene. (C) Saggio premiscelato. Un mAb viene immobilizzato sul biosensore e legato al complesso antigene-mAb1 pre-legato. Il formato del dosaggio premix viene in genere utilizzato per chiarire risultati ambigui ottenuti da altri formati di binning.

Current capabilities in antibody engineering allow for rapid generation of large antibody libraries against a therapeutic target. Characterization of the target protein’s epitope regions in early stage drug development is essential to understanding the function and mechanism and provides information for a more targeted development of therapeutic antibodies. Epitope binning is a process that enables segmentation of antibodies into bins based on the antigen region or epitope, bound by each antibody. Since monoclonal antibodies (mAbs) in different bins bind to distinct epitopes that can display diverse functional characteristics, epitope binding information can increase the likelihood of choosing lead antibody pools with desired properties. Epitope binning assays also are performed to identify mAbs that bind similar epitopes to a previously characterized mAb for generations of biosimilars or biobetters. These assays   can also be useful in reagent development programs to identify antibody pairs that are best suitable for development of ELISA assays. Octet® systems provide several advantages for these assays: 

- High-throughput and assay speed. 

- Versatility 

– choose from three assay formats (Figure ).

 - Availability of a variety of biosensor chemistries suitable for analysis. 

- Ability to characterize antibodies from hybridoma supernatants, phage lysates or purified samples.

ITALIANO

Le attuali capacità nell'ingegneria degli anticorpi consentono la rapida generazione di grandi librerie di anticorpi contro un bersaglio terapeutico. La caratterizzazione delle regioni dell'epitopo della proteina bersaglio nella fase iniziale dello sviluppo del farmaco è essenziale per comprendere la funzione ed il meccanismo e fornisce informazioni per uno sviluppo più mirato di anticorpi terapeutici. Il binning degli epitopi è un processo che consente la segmentazione degli anticorpi in contenitori basati sulla regione dell'antigene o sull'epitopo, legati da ciascun anticorpo. Poiché gli anticorpi monoclonali (mAb) in contenitori diversi si legano a epitopi distinti che possono mostrare diverse caratteristiche funzionali, le informazioni sul legame degli epitopi possono aumentare la probabilità di scegliere pool di anticorpi importanti con le proprietà desiderate. Vengono anche eseguiti saggi di binning di epitopi per identificare mAb che legano epitopi simili ad un mAb precedentemente caratterizzato per generazioni di biosimilari o biobetter. Questi test possono essere utili anche nei programmi di sviluppo dei reagenti per identificare le coppie di anticorpi più adatte per lo sviluppo di test ELISA. I sistemi Octet® offrono numerosi vantaggi per questi test:

- Alta produttività e velocità di analisi.

- Versatilità

– Scegliere tra tre formati di analisi (Figura ).

 - Disponibilità di una varietà di biosensori chimici adatti per l'analisi.

- Capacità di caratterizzare anticorpi da surnatanti di ibridomi, lisati di fagi o campioni purificati.

Da:

https://offers.the-scientist.com/hubfs/TS_PPL_Sartorius_QC%20Octet_white%20paper/Octet-Label-Free-Detection-eBook-4007-en-L-Sartorius%20(1).pdf