Innovative solutions for accurate western blot imaging / Soluzioni innovative per un imaging western blot accurato

Innovative solutions for accurate western blot imaging / Soluzioni innovative per un imaging western blot accurato

Segnalato dal Dott. Giuseppe Cotellessa / Reported by Dr. Giuseppe Cotellessa

Fig 1. Dendrobium nobile orchid imaged in the ImageQuantTM 800 system using different LED and filter combinations. The imager revealed how parts of the flower fluoresced under different excitation wavelengths, showing vein-like patterns. / Dendrobium nobile orchid ripreso nel sistema ImageQuantTM 800 utilizzando diverse combinazioni di LED e filtri. L'imager ha rivelato come parti del fiore emettessero fluorescenza a diverse lunghezze d'onda di eccitazione, mostrando schemi simili a vene

Introduction 

A western blot is a common analytical technique used to detect specific proteins within a sample, evaluate the size of a particular protein and/or to determine the level of protein expression. While the advent of X-ray film and digital imaging solutions (e.g., charge-coupled device (CCD) camerabased imagers and scanner-based systems) has transformed western blot detection, successful imaging requires the combined use of an accurate protein detection technique and imaging device. The choice of imaging solution therefore depends on the protein detection method, as well as the advantages and limitations of each solution. The Amersham ImageQuantTM 800 GxP biomolecular imagers, developed by Cytiva, offer many benefits for chemiluminescence and fluorescence detection, including enhanced sensitivity, resolution and data security. 

Save time in western blotting

How much time do you spend finding the right exposure settings for Western blots? Find out how the right CCD imager can help you work more efficiently, freeing valuable resources to drive your research forward, faster. Western blotting efficiency in the lab Using time in the lab efficiently promotes success in research with faster generation of key data leading to scientific breakthroughs. To drive efficiency, it is important to watch for ways to improve and refine routine practices and procedures, as time savings in these daily repetitive activities can add up quickly. Western blotting is an affordable process that reliably answers important basic questions regarding proteins of interest. For this reason, Western blots, or protein immunoblots, are used daily by most labs working on protein-based research. While the Western blotting method has stayed largely unchanged over the last few decades, there remains opportunity to increase efficiency in the process. Saving even just a little bit of time on every Western blot can add up to substantial time-savings over the course of a week, month, or year—time you and your colleagues can spend on other valuable research efforts. Optimizing exposure times in CCD imaging Western blots often have bands of varying intensity, with low-expression proteins presenting with lower band intensity and highly expressed proteins represented by more intense bands. Low-intensity bands need longer exposure times to be visible, while the high-expression bands require shorter exposure times to avoid saturation.

The varying imaging requirements of low- and high-expression proteins make visualizing both on the same blot a challenge. Although the introduction of digital imagers has provided substantial improvements over X-ray films, the dynamic range of many CCD imagers today remains limited. The user has to choose the optimal exposure settings by trial-and-error, and it is often not possible to visualize both lowand high-intensity bands on the same blot without some trade-off. Another challenge of this trial-and-error approach is the race against time to find the optimal exposure conditions, usually requiring multiple test exposures to get the best possible image. As the chemiluminescent reaction progresses, the signal-to-noise ratio (SNR) peaks and begins to drop until the signal is indistinguishable from noise. There is also a risk that membranes dry out over time. Once the chemiluminescent reaction progresses and the signal becomes weaker or undetectable, it might be necessary to redo the blot if you have not yet been able to find optimal exposure conditions. If you do have an image, the SNR might limit your ability to quantitate across strong and weak bands simultaneously. Some CCD imagers offer a function that adjusts exposure time automatically; however, this function is based on the brightest signal on the blot and cannot improve the SNR of the images. This approach compromises the visibility of lower intensity bands, which are possibly the bands you are most interested in seeing. SNOW mode saves time with automatic signal-to-noise optimization The key to saving precious time when using Western blots for protein analysis is capturing an image with optimal SNR quickly and reliably. Our proprietary intelligent algorithm, the SNOW (signal-to-noise optimization watch) imaging mode, can help you detect weak bands without saturating strong bands and achieve high sensitivity without compromising image quality. SNOW imaging is available with the Amersham ImageQuantTM 800 GxP biomolecular imager. When using this imaging mode, the system continually checks and averages image intensity data from multiple exposures   

Remote Image transfer and scheduling 

Easy-to-use software on the Amersham ImageQuantTM 800 GxP biomolecular imager can help improve research efficiency by enabling remote system management, saving you a trip to the lab. The ImageQuantTM CONNECT software allows you to schedule equipment usage and access image files from your desk. The Amersham ImageQuantTM 800 GxP biomolecular imager software includes automatic color marker overlay, saving time by automatically imaging and overlaying white light color marker images with chemiluminescence images of the same blot. This approach makes it easier to determine the molecular weight of your bands of interest. With most other imagers, users have to take separate white light and  chemiluminescent images and manually overlay them in a separate analysis software. The Amersham ImageQuantTM 800 GxP biomolecular imager also automatically provides users with both grayscale and colored images. High quality, efficient CCD imaging Small time savings in tasks that are part or many researchers’ daily routine lead to improvements in overall research productivity over time. Designed with features such as SNOW imaging and ImageQuantTM CONNECT software, the Amersham ImageQuantTM 800 GxP biomolecular imager generates the best possible images with improved data handling to deliver the ultimate solution for fast, efficient Western blotting.

ITALIANO

Introduzione

Un western blot è una tecnica analitica comune utilizzata per rilevare proteine ​​specifiche all'interno di un campione, valutare le dimensioni di una particolare proteina e/o per determinare il livello di espressione proteica. Sebbene l'avvento delle pellicole a raggi X e delle soluzioni di imaging digitale (ad esempio, imager basati su fotocamera per dispositivi ad accoppiamento di carica (CCD) e sistemi basati su scanner) abbia trasformato il rilevamento delle Western Blot, l'imaging di successo richiede l'uso combinato di un'accurata tecnica di rilevamento delle proteine ​​ed imaging dispositivo. La scelta della soluzione di imaging dipende quindi dal metodo di rilevamento delle proteine, nonché dai vantaggi e dai limiti di ciascuna soluzione. Gli imager biomolecolari Amersham ImageQuantTM 800 GxP, sviluppati da Cytiva, offrono molti vantaggi per il rilevamento della chemiluminescenza e della fluorescenza, tra cui maggiore sensibilità, risoluzione e sicurezza dei dati.

Risparmia tempo con il western blotting

Quanto tempo dedichi a trovare le giuste impostazioni di esposizione per le Western blot? Scopri come il giusto imager CCD può aiutarti a lavorare in modo più efficiente, liberando preziose risorse per portare avanti la tua ricerca, più velocemente. Efficienza del western blotting in laboratorio 

Usare il tempo in laboratorio in modo efficiente promuove il successo nella ricerca con una generazione più rapida di dati chiave che portano a scoperte scientifiche. Per promuovere l'efficienza, è importante cercare modi per migliorare e perfezionare le pratiche e le procedure di routine, poiché il risparmio di tempo in queste attività ripetitive quotidiane può aumentare rapidamente. Il western blotting è un processo conveniente che risponde in modo affidabile ad importanti domande di base sulle proteine ​​di interesse. Per questo motivo, i Western blot, o immunoblot proteici, vengono utilizzati quotidianamente dalla maggior parte dei laboratori che lavorano sulla ricerca basata sulle proteine. Sebbene il metodo del Western blotting sia rimasto sostanzialmente invariato negli ultimi decenni, rimane l'opportunità di aumentare l'efficienza nel processo. Risparmiare anche solo un po' di tempo su ogni Western blot può comportare un notevole risparmio di tempo nel corso di una settimana, un mese od un anno, tempo che tu e i tuoi colleghi potete dedicare ad altri preziosi sforzi di ricerca. Ottimizzazione dei tempi di esposizione nell'imaging CCD I western blot hanno spesso bande di intensità variabile, con proteine ​​a bassa espressione che presentano un'intensità di banda inferiore e proteine ​​altamente espresse rappresentate da bande più intense. Le bande a bassa intensità richiedono tempi di esposizione più lunghi per essere visibili, mentre le bande ad alta espressione richiedono tempi di esposizione più brevi per evitare la saturazione.

I diversi requisiti di imaging delle proteine ​​a bassa ed alta espressione rendono la visualizzazione di entrambi sulla stessa macchia una sfida. Sebbene l'introduzione degli imager digitali abbia fornito miglioramenti sostanziali rispetto alle pellicole a raggi X, la gamma dinamica di molti imager CCD oggi rimane limitata. L'utente deve scegliere le impostazioni di esposizione ottimali per tentativi ed errori e spesso non è possibile visualizzare le bande di bassa ed alta intensità sulla stessa macchia senza qualche compromesso. Un'altra sfida di questo approccio per tentativi ed errori è la corsa contro il tempo per trovare le condizioni di esposizione ottimali, che di solito richiedono più esposizioni di prova per ottenere la migliore immagine possibile. Con il progredire della reazione chemiluminescente, il rapporto segnale-rumore (SNR) raggiunge il picco ed inizia a diminuire fino a quando il segnale non è distinguibile dal rumore. Esiste anche il rischio che le membrane si secchino nel tempo. Una volta che la reazione chemiluminescente progredisce ed il segnale diventa più debole o non rilevabile, potrebbe essere necessario ripetere la macchia se non si è ancora riusciti a trovare le condizioni di esposizione ottimali. Se hai un'immagine, l'SNR potrebbe limitare la tua capacità di quantificare simultaneamente le bande forti e deboli. Alcuni imager CCD offrono una funzione che regola automaticamente il tempo di esposizione; tuttavia, questa funzione si basa sul segnale più luminoso sulla macchia e non può migliorare l'SNR delle immagini. Questo approccio compromette la visibilità delle bande di intensità più bassa, che sono forse le bande che ti interessa di più vedere. La modalità SNOW consente di risparmiare tempo con l'ottimizzazione automatica del rapporto segnale-rumore La chiave per risparmiare tempo prezioso quando si utilizzano i Western blot per l'analisi delle proteine ​​è acquisire un'immagine con un SNR ottimale in modo rapido ed affidabile. Il nostro algoritmo intelligente proprietario, la modalità di imaging SNOW (signal-to-noise optimization watch), può aiutarti a rilevare le bande deboli senza saturare le bande forti ed ottenere un'elevata sensibilità senza compromettere la qualità dell'immagine. L'imaging SNOW è disponibile con l'imager biomolecolare Amersham ImageQuantTM 800 GxP. Quando si utilizza questa modalità di imaging, il sistema controlla continuamente e calcola la media dei dati sull'intensità dell'immagine da esposizioni multiple.

Trasferimento e pianificazione delle immagini in remoto

Il software di facile utilizzo sull'imager biomolecolare Amersham ImageQuantTM 800 GxP può aiutare a migliorare l'efficienza della ricerca consentendo la gestione remota del sistema, risparmiando un viaggio in laboratorio. Il software ImageQuantTM CONNECT consente di programmare l'utilizzo dell'apparecchiatura e di accedere ai file di immagine dalla propria scrivania. Il software di imaging biomolecolare ImageQuantTM 800 GxP di Amersham include la sovrapposizione automatica del marcatore di colore, risparmiando tempo grazie all'imaging automatico ed alla sovrapposizione di immagini di marcatore di colore a luce bianca con immagini di chemiluminescenza della stessa macchia. Questo approccio semplifica la determinazione del peso molecolare delle bande di interesse. Con la maggior parte degli altri imager, gli utenti devono acquisire immagini separate di luce bianca e chemiluminescente e sovrapporle manualmente in un software di analisi separato. L'imager biomolecolare Amersham ImageQuantTM 800 GxP fornisce automaticamente agli utenti sia immagini in scala di grigi che a colori. Imaging CCD di alta qualità ed efficiente Il piccolo risparmio di tempo nelle attività che fanno parte della routine quotidiana di molti ricercatori porta a miglioramenti della produttività complessiva della ricerca nel tempo. Progettato con funzionalità come l'imaging SNOW e il software ImageQuantTM CONNECT, l'imager biomolecolare ImageQuantTM 800 GxP di Amersham genera le migliori immagini possibili con una migliore gestione dei dati per fornire la soluzione definitiva per il Western blotting veloce ed efficiente.

Da:

https://f.hubspotusercontent40.net/hubfs/547446/Technology%20Networks/TN%20Editorial%20Calendar/How%20To%20Guides/2022/TN_Cytiva_WesternBlot_eBook.pdf?__hstc=8807082.074aceb79027e793890018c0152531d2.1643566337753.1651364927218.1651367826740.35&__hssc=8807082.1.1651367826740&__hsfp=1392618001&hsCtaTracking=456102a3-b37c-4b06-ac42-e85f5fc38bdc%7Cde86cdc6-eee1-42bc-904e-1a3e383c852c